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中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)
GB4789. 34 — 2016
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 雙歧桿菌檢驗(yàn)
2016-12-23 發(fā)布 2017-06-23 實(shí)施
中華人民共和國(guó)國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)
國(guó) 家 食 品 藥 品 監(jiān) 督 管 理 總 局
發(fā) 布
GB4789. 34 — 2016
Ⅰ
前 言
本標(biāo)準(zhǔn)代替 GB4789. 34 — 2012 《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 雙歧桿菌的鑒定》。
本標(biāo)準(zhǔn)與 GB4789.
34 — 2012 相比,主要變化如下:
———增加了雙歧桿菌的計(jì)數(shù)方法;
———增加了 MRS 培養(yǎng)基;
———修改了標(biāo)準(zhǔn)的適用范圍;
———修改了附錄 B 為可選項(xiàng)。
GB4789. 34 — 2016
1
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 雙歧桿菌檢驗(yàn)
1  范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了雙歧桿菌(
Bifidobacterium )的鑒定及計(jì)數(shù)方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于雙歧桿菌純菌菌種的鑒定及計(jì)數(shù)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中僅含有單一雙歧桿菌的菌種
鑒定。本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中僅含有雙歧桿菌屬的計(jì)數(shù),即食品中可包含一個(gè)或多個(gè)不同的雙歧桿菌
菌種。
2  設(shè)備和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:
2. 1  恒溫培養(yǎng)箱: 36℃±1℃ 。
2. 2  冰箱: 2℃~5℃ 。
2. 3  天平:感量 0. 01g 。
2. 4  無(wú)菌試管: 18mm×180mm 、 15mm×100mm 。
2. 5  無(wú)菌吸管: 1mL (具 0. 01mL 刻度)、 10mL (具 0. 1mL 刻度)或微量移液器( 200 μ L~1000 μ L )及
配套吸頭。
2. 6  無(wú)菌培養(yǎng)皿:直徑 90mm 。
3  培養(yǎng)基和試劑
3. 1  雙歧桿菌培養(yǎng)基:見(jiàn) A. 1 。
3. 2 PYG 培養(yǎng)基:見(jiàn) A. 2 。
3. 3 MRS 培養(yǎng)基:見(jiàn) A. 3 。
3. 4  甲醇:分析純。
3. 5  三氯甲烷:分析純。
3. 6  硫酸:分析純。
3. 7  冰乙酸:分析純。
3. 8  乳酸:分析純。
4  檢驗(yàn)程序
雙歧桿菌的檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖 1 。
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圖 1  雙歧桿菌的檢驗(yàn)程序
5  操作步驟
5. 1  無(wú)菌要求
全部操作過(guò)程均應(yīng)遵循無(wú)菌操作程序。
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3
5. 2  雙歧桿菌的鑒定
5. 2. 1  純菌菌種
5. 2. 1. 1  樣品處理:半固體或液體菌種直接接種在雙歧桿菌瓊脂平板或 MRS 瓊脂平板。固體菌種或
真空冷凍干燥菌種,可先加適量滅菌生理鹽水或其他適宜稀釋液,溶解菌粉。
5. 2. 1. 2  接種:接種于雙歧桿菌瓊脂平板或 MRS 瓊脂平板。 36℃±1℃ 厭氧培養(yǎng) 48h±2h ,可延長(zhǎng)至
72h±2h 。
5. 2. 2  食品樣品
5. 2. 2. 1  樣品處理:取樣 25. 0g ( mL ),置于裝有 225.0mL 生理鹽水的滅菌錐形瓶或均質(zhì)袋內(nèi),于
8000r / min~10000r / min 均質(zhì) 1min~2min ,或用拍擊式均質(zhì)器拍打 1min~2min ,制成 1∶10 的
樣品勻液。冷凍樣品可先使其在 2℃~5℃ 條件下解凍,時(shí)間不超過(guò) 18h ;也可在溫度不超過(guò) 45℃ 的
條件解凍,時(shí)間不超過(guò) 15min 。
5. 2. 2. 2  接種或涂布:將上述樣品勻液接種在雙歧桿菌瓊脂平板或 MRS 瓊脂平板,或取 0. 1mL 適當(dāng)
稀釋度的樣品勻液均勻涂布在雙歧桿菌瓊脂平板或 MRS 瓊脂平板。 36℃±1℃ 厭氧培養(yǎng) 48h±2h ,
可延長(zhǎng)至 72h±2h 。
5. 2. 2. 3  純培養(yǎng):挑取 3 個(gè)或以上的單個(gè)菌落接種于雙歧桿菌瓊脂平板或 MRS 瓊脂平板。 36 ℃±
1℃ 厭氧培養(yǎng) 48h±2h ,可延長(zhǎng)至 72h±2h 。
5. 2. 3  菌種鑒定
5. 2. 3. 1  涂片鏡檢:挑取雙歧桿菌平板或 MRS 平板上生長(zhǎng)的雙歧桿菌單個(gè)菌落進(jìn)行染色。雙歧桿菌
為革蘭氏染色陽(yáng)性,呈短桿狀、纖細(xì)桿狀或球形,可形成各種分支或分叉等多形態(tài),不抗酸,無(wú)芽孢,無(wú)
動(dòng)力。
5. 2. 3. 2  生化鑒定:挑取雙歧桿菌平板或 MRS 平板上生長(zhǎng)的雙歧桿菌單個(gè)菌落,進(jìn)行生化反應(yīng)檢測(cè)。
過(guò)氧化氫酶試驗(yàn)為陰性。雙歧桿菌的主要生化反應(yīng)見(jiàn)表 1 �？蛇x擇生化鑒定試劑盒或全自動(dòng)微生物生
化鑒定系統(tǒng)。
表 1  雙歧桿菌菌種主要生化反應(yīng)
編號(hào) 項(xiàng)目
兩歧雙歧桿菌
( B . bifidum )
嬰兒雙歧桿菌
( B .
infantis )
長(zhǎng)雙歧桿菌
( B .
longum )
青春雙歧桿菌
( B .
adolescentis )
動(dòng)物雙歧桿菌
( B .
animalis )
短雙歧桿菌
( B .
breve )
1 L- 阿拉伯糖 - - + + + -
2 D- 核糖 - + + + + +
3 D- 木糖 - + + d + +
4 L- 木糖 - - - - - -
5
阿東醇
- - - - - -
6 D- 半乳糖 d + + + d +
7 D- 葡萄糖 + + + + + +
8 D- 果糖 d + + d d +
9 D- 甘露糖 - + + - - -
10 L- 山梨糖 - - - - - -
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表 1 (續(xù))
編號(hào) 項(xiàng)目
兩歧雙歧桿菌
( B . bifidum )
嬰兒雙歧桿菌
( B .
infantis )
長(zhǎng)雙歧桿菌
( B .
longum )
青春雙歧桿菌
( B .
adolescentis )
動(dòng)物雙歧桿菌
( B .
animalis )
短雙歧桿菌
( B .
breve )
11 L- 鼠李糖 - - - - - -
12
衛(wèi)矛醇
- - - - - -
13
肌醇
- - - - - +
14
甘露醇
- - - - a - - a
15
山梨醇
- - - - a - - a
16
α- 甲 基 -D- 葡 萄
糖甙
- - + - - -
17
N - 乙 酰 - 葡 萄
糖胺
- - - - - +
18
苦杏仁甙(扁桃
甙)
- - - + + -
19
七葉靈
- - + + + -
20
水楊甙(柳醇)
- + - + + -
21 D- 纖維二糖 - + - d - -
22 D- 麥芽糖 - + + + + +
23 D- 乳糖 + + + + + +
24 D- 蜜二糖 - + + + + +
25 D- 蔗糖 - + + + + +
26 D- 海藻糖(覃糖) - - - - - -
27
菊糖(菊根粉)
- - a - - a - - a
28 D- 松三糖 - - + + - -
29 D- 棉籽糖 - + + + + +
30
淀粉
- - - + - -
31
肝糖(糖原)
- - - - - -
32
龍膽二糖
- + - + + +
33
葡萄糖酸鈉
- - - + - -
注: + 表示 90% 以上菌株陽(yáng)性; - 表示 90% 以上菌株陰性; d 表示 11%~89% 以上菌株陽(yáng)性;
a
表示某些菌株陽(yáng)性。
5. 2. 3. 3  有機(jī)酸測(cè)定:測(cè)定雙歧桿菌的有機(jī)酸代謝產(chǎn)物(可選項(xiàng)),見(jiàn)附錄 B 。
5. 3  雙歧桿菌的計(jì)數(shù)
5. 3. 1  純菌菌種
5. 3. 1. 1  固體和半固體樣品的制備:以無(wú)菌操作稱取 2.
0g
樣品,置于盛有 198.
0mL 稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)
杯內(nèi),
8000r / min~10000r / min 均質(zhì) 1min~2min ,或置于盛有 198. 0mL 稀釋液的無(wú)菌均質(zhì)袋中,用
拍擊式均質(zhì)器拍打 1min~2min ,制成 1∶100 的樣品勻液。
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5
5. 3. 1. 2  液體樣品的制備:以無(wú)菌操作量取 1. 0mL 樣品,置于 9. 0mL 稀釋液中,混勻,制成 1∶10 的樣
品勻液。
5. 3. 2  食品樣品
5. 3. 2. 1  樣品處理:取樣 25. 0g ( mL ),置于裝有 225.0mL 生理鹽水的滅菌錐形瓶或均質(zhì)袋內(nèi),于
8000r / min~10000r / min 均質(zhì) 1min~2min ,或用拍擊式均質(zhì)器拍打 1min~2min ,制成 1∶10 的
樣品勻液。冷凍樣品可先使其在 2℃~5℃ 條件下解凍,時(shí)間不超過(guò) 18h ;也可在溫度不超過(guò) 45℃ 的
條件解凍,時(shí)間不超過(guò) 15min 。
5. 3. 3  系列稀釋及培養(yǎng)
用 1mL 無(wú)菌吸管或微量移液器,制備 10 倍系列稀釋樣品勻液,于 8000r / min~10000r / min 均
質(zhì) 1min~2min ,或用拍擊式均質(zhì)器拍打 1min~2min 。每遞增稀釋一次,即換用 1 次 1mL 滅菌吸管
或吸頭。根據(jù)對(duì)樣品濃度的估計(jì),選擇 2 個(gè) ~3 個(gè)適宜稀釋度的樣品勻液,在進(jìn)行 10 倍遞增稀釋時(shí),吸
取 1.
0mL 樣品勻液于無(wú)菌平皿內(nèi),每個(gè)稀釋度做兩個(gè)平皿。同時(shí),分別吸取 1. 0mL 空白稀釋液加入
兩個(gè)無(wú)菌平皿內(nèi)作空白對(duì)照。及時(shí)將 15mL~20mL 冷卻至 46 ℃ 的雙歧桿菌瓊脂培養(yǎng)基或 MRS 瓊
脂培養(yǎng)基(可放置于 46℃±1℃ 恒溫水浴箱中保溫)傾注平皿,并轉(zhuǎn)動(dòng)平皿使其混合均勻。從樣品稀釋
到平板傾注要求在 15min 內(nèi)完成。待瓊脂凝固后,將平板翻轉(zhuǎn),
36℃±1℃ 厭氧培養(yǎng) 48h±2h ,可延
長(zhǎng)至 72h±2h 。培養(yǎng)后計(jì)數(shù)平板上的所有菌落數(shù)。
5. 3. 4  菌落計(jì)數(shù)
5. 3. 4. 1  可用肉眼觀察,必要時(shí)用放大鏡或菌落計(jì)數(shù)器,記錄稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的菌落數(shù)量。菌落計(jì)數(shù)以
菌落形成單位(
colony-formingunits , CFU )表示。
5. 3. 4. 2  選取菌落數(shù)在 30CFU~300CFU 之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板計(jì)數(shù)菌落總數(shù)。低于 30CFU
的平板記錄具體菌落數(shù),大于 300CFU 的可記錄為多不可計(jì)。每個(gè)稀釋度的菌落數(shù)應(yīng)采用兩個(gè)平板的
平均數(shù)。
5. 3. 4. 3  其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋
度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以
2 ,代表一個(gè)平板菌落數(shù)。
5. 3. 4. 4  當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線的鏈狀生長(zhǎng)時(shí),則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。
5. 3. 5  結(jié)果的表述
5. 3. 5. 1  若只有一個(gè)稀釋度平板上的菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi),計(jì)算兩個(gè)平板菌落數(shù)的平均值,再將平
均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù),作為每克或每毫升中菌落總數(shù)結(jié)果。
5. 3. 5. 2  若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi)時(shí),按式( 1 )計(jì)算:
N =
􀰑 C
(
n 1 +0. 1 n 2 ) d
…………………………( 1 )
式中:
N
———樣品中菌落數(shù);
􀰑 C ———平板(含適宜范圍菌落數(shù)的平板)菌落數(shù)之和;
n 1
———第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù);
n 2
———第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù);
d
———稀釋因子(第一稀釋度)。
5. 3. 5. 3  若所有稀釋度的平板上菌落數(shù)均大于 300CFU ,則對(duì)稀釋度最高的平板進(jìn)行計(jì)數(shù),其他平板可
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記錄為多不可計(jì),結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計(jì)算。
5. 3. 5. 4  若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均小于 30CFU ,則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)
計(jì)算。
5. 3. 5. 5  若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無(wú)菌落生長(zhǎng),則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。
5. 3. 5. 6  若所有稀釋度的平板菌落數(shù)均不在 30CFU~300CFU 之間,其中一部分小于 30CFU 或大于
300CFU 時(shí),則以最接近 30CFU 或 300CFU 的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計(jì)算。
5. 3. 6  菌落數(shù)的報(bào)告
5. 3. 6. 1  菌落數(shù)小于 100CFU 時(shí),按“四舍五入”原則修約,以整數(shù)報(bào)告。
5. 3. 6. 2  菌落數(shù)大于或等于 100CFU 時(shí),第 3 位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后,取前 2 位數(shù)字,后面
用 0 代替位數(shù);也可用 10 的指數(shù)形式來(lái)表示,按“四舍五入”原則修約后,采用兩位有效數(shù)字。
5. 3. 6. 3  稱重取樣以 CFU / g 為單位報(bào)告,體積取樣以 CFU / mL 為單位報(bào)告。
5. 4  結(jié)果與報(bào)告
根據(jù) 5.
2. 3. 1 、 5. 2. 3. 2 , 5. 2. 3. 3 結(jié)果,報(bào)告雙歧桿菌屬的種名。根據(jù) 5. 3. 6 菌落計(jì)數(shù)結(jié)果出具報(bào)告,報(bào)
告單位以 CFU / g ( mL )表示。
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附 錄 A
培養(yǎng)基和試劑
A. 1  雙歧桿菌瓊脂培養(yǎng)基
A. 1. 1  成分
蛋白胨 15.
0g
酵母浸膏
2. 0g
葡萄糖
20. 0g
可溶性淀粉
0. 5g
氯化鈉
5. 0g
西紅柿浸出液
400. 0mL
吐溫 80
1. 0mL
肝粉
0. 3g
瓊脂粉
20. 0g
加蒸餾水至
1000. 0mL
A. 1. 2  制法
A. 1. 2. 1  半胱氨酸鹽溶液的配制:稱取半胱氨酸 0. 5g ,加入 1. 0mL 鹽酸,使半胱氨酸全部溶解,配制成
半胱氨酸鹽溶液。
A. 1. 2. 2  西紅柿浸出液的制備:將新鮮的西紅柿洗凈后稱重切碎,加等量的蒸餾水在 100 ℃ 水浴中加
熱,攪拌 90min ,然后用紗布過(guò)濾,校正 pH7.0±0.1 ,將浸出液分裝后, 121 ℃ 高壓滅菌 15 min~
20min 。
A. 1. 2. 3  制法:將 A. 1. 1 所有成分加入蒸餾水中,加熱溶解,然后加入半胱氨酸鹽溶液,校正
pH
至 6.
8
±0. 1 。分裝后 121℃ 高壓滅菌 15min~20min 。
A. 2 PYG 液體培養(yǎng)基
A. 2. 1  成分
蛋白胨
10. 0g
葡萄糖
2. 5g
酵母粉
5. 0g
半胱氨酸 -HCl
0. 25g
鹽溶液
20. 0mL
維生素 K 1 溶液
0. 5mL
氯化血紅素溶液 5mg / mL 2.
5mL
加蒸餾水至
500. 0mL
A. 2. 2  制法
A. 2. 2. 1  鹽溶液的配制:稱取無(wú)水氯化鈣 0. 2g ,硫酸鎂 0. 2g ,磷酸氫二鉀 1. 0g ,磷酸二氫鉀 1. 0g ,碳酸
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8
氫鈉 10.
0g ,氯化鈉 2.
0g ,加蒸餾水至 1000mL 。
A. 2. 2. 2  氯化血紅素溶液( 5mg / mL )的配制:稱取氯化血紅素 0. 5g 溶于 1mol
/ L 氫氧化鈉 1.
0mL
中,加蒸餾水至 100mL ,
121℃ 高壓滅菌 15min~20min 。
A. 2. 2. 3  維生素 K 1 溶液的配制:稱取維生素 K 1 1. 0g ,加無(wú)水乙醇 99. 0mL ,過(guò)濾除菌,避光冷藏保存。
A. 2. 2. 4  制法:除氯化血紅素溶液和維生素 K 1 溶液外, A. 2. 1 其余成分加入蒸餾水中,加熱溶解,校正
pH
至 6.
0±0. 1 ,加入中性紅溶液。分裝后 121℃ 高壓滅菌 15min~20min 。臨用時(shí)加熱熔化瓊脂,加
入氯化血紅素溶液和維生素 K 1 溶液,冷至 50℃ 使用。
A. 3 MRS 培養(yǎng)基
A. 3. 1  成分
蛋白胨
10. 0g
牛肉粉
5. 0g
酵母粉
4. 0g
葡萄糖
20. 0g
吐溫 80
1. 0mL
K 2 HPO 4 · 7H 2 O 2. 0g
醋酸鈉· 3H 2 O
5. 0g
檸檬酸三銨
2. 0g
MgSO 4 · 7H 2 O 0. 2g
MnSO 4 · 4H 2 O 0. 05g
瓊脂粉
15. 0g
加蒸餾水至
1000. 0mL
A. 3. 2  制法
將 A.
3. 1 所有成分加入蒸餾水中,加熱溶解,調(diào)節(jié)
pH
至 6.
2±0. 1 ,分裝后 121℃ 高壓滅菌 15min~
20min 。
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附 錄 B
雙歧桿菌的有機(jī)酸代謝產(chǎn)物檢測(cè)方法
B. 1  雙歧桿菌培養(yǎng)液制備
挑取雙歧桿菌瓊脂平板或 MRS 瓊脂平板上純培養(yǎng)的雙歧桿菌接種于 PYG 液體培養(yǎng)基,同時(shí)用未
接種菌的 PYG 液體培養(yǎng)基做空白對(duì)照,厭氧,
36℃±1℃ 培養(yǎng) 48h 。
B. 2  標(biāo)準(zhǔn)液的配制
B. 2. 1  乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:準(zhǔn)確吸取分析純冰乙酸 5. 7mL ,加水稀釋至 100. 0mL ,搖勻,進(jìn)行標(biāo)定,配成約
1. 0mol
/ L 的乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)定方法為:準(zhǔn)確稱取乙酸 3.
0g ,加水 15.
0mL ,酚酞指示液 2 滴,用
1. 0mol
/ mL 氫氧化鈉溶液滴定,并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。 1.
0mL1mol
/ mL 氫氧化鈉溶液相當(dāng)
于 60.
05mg 的乙酸。
B. 2. 2  乙酸使用液:將經(jīng)標(biāo)定的乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用水稀釋至 20. 0mmol
/ L 。
B. 2. 3  乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液:吸取分析純?nèi)樗?8.4 mL ,加水稀釋至 100.0 mL ,搖勻,進(jìn)行標(biāo)定,配成約
1. 0mol
/ L 的乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。標(biāo)定方法為:準(zhǔn)確稱取乳酸 1.
0g ,加水 50.
0mL ,加入 1mol
/ mL 氫氧化
鈉滴定液 25.
0mL ,煮沸 5min ,加入酚酞指示液 2 滴,同時(shí)用 0. 5mol
/ mL 硫酸滴定液滴定,并將滴定結(jié)
果用空白試驗(yàn)校正。 1.
0mL1mol
/ mL 氫氧化鈉溶液相當(dāng)于 90.
08mg 的乳酸。
B. 2. 4  乳酸使用液:將乳酸標(biāo)準(zhǔn)溶液用水稀釋至 20. 0mmol
/ L 。
B. 3  方法
B. 3. 1  乙酸的處理
取雙歧桿菌培養(yǎng)液 2.
0mL~3. 0mL 放入 10mL 離心管中,加入 0. 2mL50% 硫酸溶液(體積分
數(shù)),混勻,加入 2.
0mL 丙酮,混勻后加過(guò)量氯化鈉,劇烈振搖 1min ,再加入 2. 0mL 乙醚,振搖 1min
后,于 3000r / min 離心 5min ,將上清液轉(zhuǎn)入另一試管中,下層溶液用 2.
0mL 丙酮和 2. 0mL 乙醚重復(fù)
提取 2 次,合并有機(jī)相,于 40℃ 水浴中用氮?dú)獯抵帘M干,用 20mmol / L 的磷酸二氫鈉溶液(
pH2. 0 ) - 乙
腈(
99+1 )溶解并定容至 1. 0mL ,混勻后備用。同樣操作步驟處理乙酸標(biāo)準(zhǔn)和空白培養(yǎng)液。
B. 3. 2  乳酸的處理
取雙歧桿菌培養(yǎng)液 2.
0mL~3. 0mL 放入 10mL 比色管中, 100℃ 水浴 10min ,加入 0. 2mL50%
(體積分?jǐn)?shù))硫酸溶液,混勻,加入 1.0 mL 甲醇,于 58 ℃ 水浴 30 min 后加水 1.0 mL ,加三氯甲烷
1. 0mL ,振搖 3min , 3000r / min 離心 5min ,取三氯甲烷層分析。同樣操作步驟處理乳酸標(biāo)準(zhǔn)和空白
培養(yǎng)液。
B. 3. 3  液相色譜條件
色譜柱:
ZorbaxSb-Aq 液相色譜柱( 4.
6×150mm , 5 μ m )或其他等效色譜柱;流動(dòng)相: 20mmol
/ L
的磷酸二氫鈉溶液(
pH2. 0 ) - 乙腈( 99+1 ),等度洗脫,流速 1mL / min ;柱溫箱:
35 ℃ ;紫外檢測(cè)波長(zhǎng):
210nm ;外標(biāo)定量。
GB4789. 34 — 2016
10
B. 4  結(jié)果計(jì)算
X = A
樣 - A 空
A 標(biāo) × c
…………………………( B.
1 )
式中:
X
———樣品培養(yǎng)液中乙酸或乳酸的含量,單位為微摩爾每毫升(
μ mol
/ mL );
A 樣 ———樣品培養(yǎng)液中乙酸或乳酸的峰面積;
A 空 ———空白培養(yǎng)液中乙酸或乳酸的峰面積;
A 標(biāo) ———乙酸標(biāo)準(zhǔn)或乳酸標(biāo)準(zhǔn)的峰面積;
c
———乙酸標(biāo)準(zhǔn)或乳酸標(biāo)準(zhǔn)的濃度,單位為微摩爾每毫升(
μ mol
/ mL )。
B. 5  允許差
相對(duì)相差 ≤15% 。
B. 6  結(jié)果判定
如果乙酸(
μ mol
/ mL )與乳酸(
μ mol
/ mL )比值大于 1 ,可判定為是雙歧桿菌的有機(jī)酸代謝產(chǎn)物。