中 華 人 民 共 和 國(guó) 國(guó) 家 標(biāo) 準(zhǔn)
GB4789. 41 — 2016
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 腸桿菌科檢驗(yàn)
2016-08-31 發(fā)布 2017-03-01 實(shí)施
中 華 人 民 共 和 國(guó)
國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)
發(fā) 布
GB4789. 41 — 2016
1
食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)
食品微生物學(xué)檢驗(yàn) 腸桿菌科檢驗(yàn)
1  范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中腸桿菌科(
Enterobacteriaceae )的檢驗(yàn)方法。
本標(biāo)準(zhǔn)第一法適用于腸桿菌科含量較高的食品中腸桿菌科的計(jì)數(shù);第二法適用于腸桿菌科含量較
低食品中腸桿菌科的計(jì)數(shù)。
2  術(shù)語(yǔ)和定義
2. 1
腸桿菌科 Enterobacteriaceae
在給定條件下發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、氧化酶陰性的需氧或兼性厭氧革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌。
2. 2
腸桿菌科計(jì)數(shù) EnumerationofEnterobacteriaceae
按本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定方法,對(duì)每克或每毫升檢樣中的腸桿菌科進(jìn)行計(jì)數(shù)。
2. 3
最可能數(shù) mostprobablenumber ; MPN
基于泊松分布的一種間接計(jì)數(shù)方法。
3  設(shè)備和材料
除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,其他設(shè)備和材料如下:
3. 1  恒溫培養(yǎng)箱: 36℃±1℃ 。
3. 2  冰箱: 2℃~5℃ 。
3. 3  水浴箱: 46℃±1℃ 。
3. 4  天平:感量 0. 1g 。
3. 5  顯微鏡: 10 倍 ~100 倍。
3. 6  均質(zhì)器。
3. 7  振蕩器。
3. 8  無(wú)菌吸管: 1mL (具 0. 01mL 刻度)、 10mL (具 0. 1mL 刻度)或微量移液器及吸頭。
3. 9  無(wú)菌錐形瓶或等效容器:容量 150mL 、 500mL 。
3. 10  無(wú)菌培養(yǎng)皿:直徑 90mm 。
3. 11  無(wú)菌試管: 18mm×180mm 、 15mm×150mm 。
3. 12 pH 計(jì)或
pH
比色管或精密
pH 試紙。
4  培養(yǎng)基和試劑
4. 1  緩沖蛋白胨水( BPW ):見(jiàn) B. 1 。
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2
4. 2  緩沖葡萄糖煌綠膽鹽肉湯( EE 肉湯):見(jiàn) B. 2 。
4. 3  結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂( VRBGA ):見(jiàn) B. 3 。
4. 4  營(yíng)養(yǎng)瓊脂( NA ):見(jiàn) B. 4 。
4. 5  葡萄糖瓊脂:見(jiàn) B. 5 。
4. 6  革蘭氏染色液:見(jiàn) B. 6 。
4. 7  氧化酶試劑:見(jiàn) B. 7 。
4. 8  無(wú)菌 1mol
/ LNaOH :見(jiàn) B.
8 。
4. 9  無(wú)菌 1mol
/ LHCl :見(jiàn) B.
9 。
第一法 腸桿菌科平板計(jì)數(shù)法
5  檢驗(yàn)程序
腸桿菌科平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖 1 。
圖 1  腸桿菌科平板計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序
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6  操作步驟
6. 1  樣品的稀釋
6. 1. 1  固體和半固體樣品:稱(chēng)取 25g 樣品放入盛有 225mLBPW 的無(wú)菌均質(zhì)杯中, 8000r
/ min~
10000r
/ min 均質(zhì) 1min~2min ,或放入盛有 225 mLBPW 的無(wú)菌均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器拍打
1min~2min ,制成 1∶10 的樣品勻液。
6. 1. 2  液體樣品:以無(wú)菌吸管吸取 25mL 樣品放入盛有 225mLBPW 的無(wú)菌錐形瓶(瓶?jī)?nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)
量的無(wú)菌玻璃珠)中,充分混勻,制成 1∶10 的樣品勻液。
6. 1. 3  用 1mL 無(wú)菌吸管或微量移液器吸取 1∶10 樣品勻液 1mL ,沿管壁緩緩注入盛有 9mLBPW 的
無(wú)菌試管中(注意吸管或吸頭尖端不應(yīng)觸及稀釋液面),振搖試管或換用 1 支 1mL 無(wú)菌吸管反復(fù)吹打,
使其混合均勻,制成 1∶100 的樣品勻液。
6. 1. 4  按 6. 1. 3 操作程序,依次制成 10 倍遞增系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋 1 次,換用 1 支 1mL 無(wú)
菌吸管或吸頭。從制備樣品勻液至樣品接種完畢,全過(guò)程不得超過(guò) 15min 。
6. 2  傾注平板和培養(yǎng)
6. 2. 1  根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)及相關(guān)限量要求,選擇 2 個(gè) ~3 個(gè)適宜的連續(xù)稀釋度的樣品勻液(液
體樣品可以選擇原液),每個(gè)稀釋度接種 2 個(gè)無(wú)菌平皿。同時(shí),分別吸取 1mLBPW 加入兩個(gè)無(wú)菌平皿
內(nèi)作為空白對(duì)照。
6. 2. 2  將 10mL~15mL 冷卻至 46℃ 的 VRBGA (可放置于 46℃±1℃ 恒溫水浴箱中保溫)傾注于每
個(gè)平皿中。小心旋轉(zhuǎn)平皿,使樣品勻液與培養(yǎng)基充分混勻。
6. 2. 3  待瓊脂凝固后,傾注一薄層同樣的培養(yǎng)基覆蓋平板表層。防止蔓延生長(zhǎng)并使菌落特征更為
明顯。
6. 2. 4  待 VRBGA 平板上層瓊脂凝固后翻轉(zhuǎn)平板, 36℃±1℃ 培養(yǎng) 18h~24h 。
6. 3  典型菌落計(jì)數(shù)和確認(rèn)
6. 3. 1  腸桿菌科典型菌落為有或無(wú)沉淀環(huán)的粉紅色至紅色或紫色菌落。選取典型菌落數(shù)在 15CFU~
150CFU 之間、無(wú)蔓延菌落生長(zhǎng)的平板,只計(jì)數(shù)典型菌落數(shù)。菌落計(jì)數(shù)以菌 落形成單位 ( colony-
formingunits , CFU )表示。
6. 3. 2  其中一個(gè)平板有較大片狀菌落生長(zhǎng)時(shí),則不宜采用,而應(yīng)以無(wú)片狀菌落生長(zhǎng)的平板作為該稀釋
度的菌落數(shù);若片狀菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均勻,即可計(jì)算半個(gè)平板后乘以
2 ,代表一個(gè)平板菌落數(shù)。
6. 3. 3  當(dāng)平板上出現(xiàn)菌落間無(wú)明顯界線(xiàn)的鏈狀生長(zhǎng)時(shí),則將每條單鏈作為一個(gè)菌落計(jì)數(shù)。
6. 3. 4  從每個(gè)平板上至少挑取 5 個(gè)(小于 5 個(gè)全選)典型菌落進(jìn)行確認(rèn);如果有不同形態(tài)的典型菌落,則
每種形態(tài)分別至少挑取 1 個(gè)菌落進(jìn)行確認(rèn)。
6. 3. 5  典型菌落的確認(rèn):
a ) 分別將所挑選的每一個(gè)菌落,劃線(xiàn)于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板, 36℃±1℃ 培養(yǎng) 18h~24h ,挑取平板上
的菌落進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢、氧化酶試驗(yàn)及葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)。
b ) 革蘭氏染色鏡檢:腸桿菌科為革蘭氏陰性桿菌,無(wú)芽孢,大小為( 0.3~1.0 )
μ m× (
1.0~
6. 0 )
μ m 。
c ) 氧化酶試驗(yàn):用鉑/銥接種環(huán)或玻璃棒(不要用鎳鉻接種環(huán))挑取單個(gè)菌落涂于浸濕氧化酶試劑
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的濾紙上,濾紙的顏色在 10s 內(nèi)變成藍(lán)紫色,判為陽(yáng)性反應(yīng)。
d ) 葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn):用接種針挑取少許氧化酶陰性的同一個(gè)菌落,穿刺于葡萄糖瓊脂內(nèi),于 36℃±
1℃ 培養(yǎng) 24h±2h ,若試管內(nèi)的內(nèi)容物變?yōu)辄S色,判為陽(yáng)性反應(yīng)。
6. 4  結(jié)果的計(jì)算
6. 4. 1  一般原則
若有兩個(gè)連續(xù)稀釋度的平板典型菌落數(shù)在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi),按式(
1 )計(jì)算,示例見(jiàn) A.1 、 A.2 、
A. 3 、 A. 4 。
N =
∑ a
(
n 1 +0. 1 n 2 ) d
…………………………( 1 )
式中:
N
———樣品中腸桿菌科菌落數(shù);
∑ a ———確證的腸桿菌科菌落數(shù)之和;
n 1 ———第一稀釋度(低稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù)(含確證的腸桿菌科菌落);
n 2 ———第二稀釋度(高稀釋倍數(shù))平板個(gè)數(shù)(含確證的腸桿菌科菌落);
d
———稀釋因子(第一稀釋度)。
其中,
a 按式( 2 )計(jì)算:
a = b
A
× C
…………………………( 2 )
式中:
a ———確證的腸桿菌科菌落數(shù);
b ———某一平板中 A 個(gè)菌落中被確證為腸桿菌科的菌落數(shù), b ≤ A ;
A ———某一平板中用于確認(rèn)試驗(yàn)的菌落數(shù);
C ———某一平板中典型菌落總數(shù)。
6. 4. 2  低菌落數(shù)
若最低稀釋度(包括液體樣品原液)平板的典型菌落數(shù)均小于 15CFU ,具有確證的腸桿菌科菌落,
則以確證的菌落數(shù)乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。
若最低稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無(wú)菌落生長(zhǎng),或典型菌落數(shù)均小于 15CFU ,且無(wú)確證的
腸桿菌科菌落,則以小于 1 乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。
6. 4. 3  特殊情況
第一稀釋度平板上的典型菌落數(shù)均大于 150CFU ,且有確證的腸桿菌科菌落,以及第二稀釋度平
板上無(wú)確證的腸桿菌科菌落或典型菌落數(shù)不在 15CFU~150CFU 之間,則以確證的菌落數(shù)乘以第一
稀釋倍數(shù)計(jì)算,示例見(jiàn) A.
5 。
若所有稀釋度的平板上典型菌落數(shù)均不在適宜計(jì)數(shù)范圍內(nèi),且無(wú)確證的腸桿菌科菌落,則以小于 1
乘以最低稀釋倍數(shù)計(jì)算。
7  報(bào)告
7. 1  菌落數(shù)小于 100 時(shí),以整數(shù)報(bào)告。
7. 2  菌落數(shù)大于或等于 100 時(shí),對(duì)第 3 位數(shù)字進(jìn)行修約后,取前 2 位數(shù)字,后面用 0 代替位數(shù);也可用
10 的指數(shù)形式來(lái)表示,采用兩位有效數(shù)字。
7. 3  數(shù)字修約按“四舍五入”原則進(jìn)行。
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7. 4  若所有平板上為蔓延菌落而無(wú)法計(jì)數(shù),則報(bào)告菌落蔓延。
7. 5  若空白對(duì)照上有菌落生長(zhǎng),則此次檢測(cè)結(jié)果無(wú)效。
7. 6  稱(chēng)重取樣以 CFU / g 為單位報(bào)告,體積取樣以 CFU / mL 為單位報(bào)告。
第二法 腸桿菌科 MPN 計(jì)數(shù)法
8  檢驗(yàn)程序
腸桿菌科 MPN 計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序見(jiàn)圖 2 。
圖 2  腸桿菌科 MPN 計(jì)數(shù)法檢驗(yàn)程序
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9  操作步驟
9. 1  樣品的稀釋
按 6.
1 進(jìn)行。
9. 2  接種和培養(yǎng)
9. 2. 1  非選擇性前增菌
根據(jù)對(duì)樣品污染狀況的估計(jì)及相關(guān)限量要求,選擇 3 個(gè)適宜連續(xù)稀釋度的樣品勻液,每個(gè)稀釋度
3 管,共 9 管 BPW 于 36℃ ±1℃ 培養(yǎng) 18h±2h 。
9. 2. 2  選擇性增菌
從 BPW 各培養(yǎng)管中,分別移取 1mL 培養(yǎng)物,接種于 10mL 的 EE 肉湯中,
36℃±1℃ 培養(yǎng) 24h±
2h 。
9. 2. 3  分離
用接種環(huán)從 EE 各肉湯管中分別取培養(yǎng)物 1 環(huán),劃線(xiàn)接種于 VRBGA 平板,
36℃±1℃ 培養(yǎng) 24h±
2h ,觀(guān)察平板上有無(wú)典型菌落。
9. 3  典型菌落的確認(rèn)
典型菌落確認(rèn)見(jiàn) 6.
3 。
10  報(bào)告
腸桿菌科為革蘭氏陰性無(wú)芽胞桿菌,發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸、氧化酶陰性。只要有 1 個(gè)菌落確認(rèn)為腸桿菌
科,其所代表的 EE 管即為腸桿菌科陽(yáng)性,依據(jù) EE 陽(yáng)性管數(shù)查 MPN 表(見(jiàn)附錄 C ),報(bào)告每克(毫升)樣
品中腸桿菌科的 MPN 值。稱(chēng)重取樣以 MPN / g 為單位報(bào)告,體積取樣以 MPN / mL 為單位報(bào)告。
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附 錄 A
結(jié)果計(jì)算示例
A. 1  兩個(gè)連續(xù)稀釋度均含適宜的典型菌落數(shù)平板,并含有已確證的腸桿菌科菌落,數(shù)據(jù)見(jiàn)表 A. 1 。
表 A.
1  腸桿菌科平板計(jì)數(shù)結(jié)果示例 1
稀釋度
1∶100 (第一稀釋度) 1∶1000 (第二稀釋度)
典型菌落數(shù)/ CFU
126 145 20 24
用于確認(rèn)試驗(yàn)的菌落數(shù)/ CFU
5 5 5 5
確證的菌落數(shù)/ CFU
4 5 4 3
a 4 / 5×126=101 5 / 5×145=145 4 / 5×20=16 3 / 5×24=14
N =
101+145+16+14
[
2+ ( 0. 1×2 )]
×10
-2 =
276
0. 022 =12545
上述數(shù)據(jù)按 7. 2 數(shù)字修約后,表示為 13000 或 1. 3×10
4 。
A. 2  兩個(gè)連續(xù)稀釋度均含適宜典型菌落數(shù)平板,其中某一稀釋度的一個(gè)平板菌落數(shù)不在適宜范圍內(nèi),
或者兩個(gè)稀釋度各有一個(gè)平板菌落數(shù)不在適宜范圍內(nèi),則相應(yīng)的平板不作為計(jì)數(shù)平板,數(shù)據(jù)見(jiàn)表 A.
2 。
表 A.
2  腸桿菌科平板計(jì)數(shù)結(jié)果示例 2
稀釋度
1∶100 (第一稀釋度) 1∶1000 (第二稀釋度)
典型菌落數(shù)/ CFU
126 118 20 10
用于確認(rèn)試驗(yàn)的菌落數(shù)/ CFU
5 8 5
—
確證的菌落數(shù)/ CFU
4 5 4
—
a 4 / 5×126=101 5 / 8×118=74 4 / 5×20=16
—
N =
101+74+16
[
2+ ( 0. 1×1 )]
×10
-2 =
191
0. 021 =9095
上述數(shù)據(jù)按 7. 2 數(shù)字修約后,表示為 9100 或 9. 1×10
3 。
A. 3  兩個(gè)連續(xù)稀釋度均含適宜典型菌落數(shù)平板,其中一個(gè)平板無(wú)已確證的腸桿菌科菌落,則相應(yīng)的平
板不作為計(jì)數(shù)平板,數(shù)據(jù)見(jiàn)表 A.
3 。
表 A.
3  腸桿菌科平板計(jì)數(shù)結(jié)果示例 3
稀釋度
1∶100 (第一稀釋度) 1∶1000 (第二稀釋度)
典型菌落數(shù)/ CFU
126 118 20 20
用于確認(rèn)試驗(yàn)的菌落數(shù)/ CFU
5 6 5 5
確證的菌落數(shù)/ CFU
4 6 4 0
a 4 / 5×126=101 6 / 6×118=118 4 / 5×20=16 0
N =
101+118+16+0
[
2+ ( 0. 1×1 )]
×10
-2 =
235
0. 021 =11190
上述數(shù)據(jù)按 7. 2 數(shù)字修約后,表示為 11000 或 1. 1×10
4 。
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A. 4  兩個(gè)連續(xù)稀釋度均含適宜典型菌落數(shù)平板,但無(wú)已確證的腸桿菌科菌落,則以小于 1 乘以最低稀
釋倍數(shù)計(jì)算。
A. 5  第一稀釋度平板上的菌落數(shù)超過(guò) 150CFU ,且有證實(shí)的腸桿菌科菌落,以及第二稀釋度平板上無(wú)
確證的腸桿菌科菌落或典型菌落數(shù)不在 15CFU~150CFU 之間,則以確證的菌落數(shù)乘以第一稀釋倍
數(shù)計(jì)算,數(shù)據(jù)見(jiàn)表 A.
5 。
表 A.
5  腸桿菌科平板計(jì)數(shù)結(jié)果示例 5
稀釋度
1∶100 (第一稀釋度) 1∶1000 (第二稀釋度)
典型菌落數(shù)/ CFU
220 198 23 17
用于確認(rèn)試驗(yàn)的菌落數(shù)/ CFU
5 5 5 5
確證的菌落數(shù)/ CFU
4 3 0 0
a 4 / 5×220=176 3 / 5×198=119 0 0
N =
176+119
2
æ
è
ç
ö
ø
÷ ×10
2 =14750
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附 錄 B
培養(yǎng)基和試劑
B. 1  緩沖蛋白胨水( BPW )
B. 1. 1  成分
蛋白胨 10.
0g
氯化鈉
5. 0g
磷酸氫二鈉
3. 5g
磷酸二氫鉀
1. 5g
蒸餾水
1000. 0mL
B. 1. 2  制法
將 B.
1. 1 成分加熱溶解,于 25℃ 時(shí)調(diào)節(jié)
pH
至 7.
2±0. 2 ,分裝于 500mL 廣口瓶中,每瓶 225mL ,
121℃ 高壓滅菌 15min 。
B. 2  緩沖葡萄糖煌綠膽鹽肉湯( EE 肉湯)
B. 2. 1  成分
蛋白胨
10. 0g
葡萄糖
5. 0g
磷酸氫二鈉(無(wú)水)
6. 45g
磷酸二氫鉀
2. 0g
牛膽鹽
20. 0g
煌綠
0. 0135g
蒸餾水
1000. 0mL
B. 2. 2  制法
將 B.
2. 1 成分溶于水中,加熱煮沸至完全溶解,加熱不宜超過(guò) 30min ,迅速冷卻培養(yǎng)基,于 25℃ 調(diào)
節(jié)
pH
至 7.
2±0. 2 ,分裝于滅菌的 18mm×180mm 試管中,每管 10mL ,不需高壓滅菌, 5℃±3℃ 可存
放一個(gè)月。
B. 3  結(jié)晶紫中性紅膽鹽葡萄糖瓊脂( VRBGA )
B. 3. 1  成分
蛋白胨
7. 0g
酵母浸膏
3. 0g
3 號(hào)膽鹽 1. 5g
葡萄糖
10. 0g
氯化鈉
5. 0g
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10
中性紅
0. 03g (或 0. 6% 酒精溶液 5mL )
結(jié)晶紫
0. 002g (或 0. 1% 水溶液 2mL )
瓊脂粉
10. 0g~12. 0g
蒸餾水
1000. 0mL
B. 3. 2  制法
將 B.
3. 1 成分溶于水中,加熱煮沸至完全溶解, 25℃ 時(shí)調(diào)節(jié)
pH
至 7.
4±0. 2 ,分裝于滅菌的錐形燒
瓶中,不需高壓滅菌,用前制備。傾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板 5℃±3℃ 可存放兩周。
B. 4  營(yíng)養(yǎng)瓊脂( NA )
B. 4. 1  成分
牛肉浸膏
3. 0g
蛋白胨
5. 0g
瓊脂粉
10. 0g~12. 0g
蒸餾水
1000. 0mL
B. 4. 2  制法
將 B.
4. 1 成分溶于水中,加熱煮沸, 25℃ 時(shí)調(diào)節(jié)
pH
至 7.
3±0. 2 , 121 ℃ 高壓滅菌 15min 。傾注平
板,使用前干燥平板。未干燥的平板于 5℃±3℃ 可存放兩周。
B. 5  葡萄糖瓊脂
B. 5. 1  成分
胰蛋白胨
10. 0g
酵母浸膏
1. 5g
葡萄糖
10. 0g
氯化鈉
5. 0g
溴甲酚紫
0. 015g (或 0. 4% 溴甲酚紫酒精溶液 3. 75mL )
瓊脂粉
10. 0g~12. 0g
蒸餾水
1000. 0mL
B. 5. 2  制法
將 B.
5. 1 成分溶于水中,加熱煮沸, 25℃ 時(shí)調(diào)節(jié)
pH
至 7.
0±0. 2 ,分裝于 15mm×150mm 試管,每
管約 5mL ,
121℃ 高壓滅菌 15min 后,試管垂直放置。于 5℃±3℃ 可存放 1 周。為去除培養(yǎng)基中的
氧氣,使用前可將葡萄糖瓊脂試管置于沸水浴中 15min ,然后迅速冷卻,備用。
B. 6  革蘭氏染色液
B. 6. 1  結(jié)晶紫染色液
B. 6. 1. 1  成分
結(jié)晶紫
1. 0g
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95% 乙醇 20. 0mL
1% 草酸銨水溶液 80. 0mL
B. 6. 1. 2  制法
將結(jié)晶紫完全溶解于乙醇中,然后與草酸銨溶液混合。
B. 6. 2  革蘭氏碘液
B. 6. 2. 1  成分
碘
1. 0g
碘化鉀
2. 0g
蒸餾水
300. 0mL
B. 6. 2. 2  制法
將碘和碘化鉀先行混合,加入少許蒸餾水充分振搖,待完全溶解后,再加蒸餾水至 300mL 。
B. 6. 3  沙黃復(fù)染液
B. 6. 3. 1  成分
沙黃
0. 25g
95% 乙醇 10. 0mL
蒸餾水
90. 0mL
B. 6. 3. 2  制法
將沙黃溶解于乙醇中,然后用蒸餾水稀釋。
B. 6. 4  染色方法
B. 6. 4. 1  將涂片在火焰上固定,滴加結(jié)晶紫染色液,染 1min ,水洗。
B. 6. 4. 2  滴加革蘭氏碘液,作用 1min ,水洗。
B. 6. 4. 3  滴加 95% 乙醇脫色 15s~30s ,直至染色液被洗掉,但不要過(guò)分脫色、水洗。
B. 6. 4. 4  加沙黃復(fù)染液,復(fù)染 1min ,水洗、干燥、鏡檢。
B. 6. 4. 5  革蘭氏陽(yáng)性菌呈紫色,革蘭氏陰性菌呈紅色。
B. 7  氧化酶試劑
B. 7. 1  成分
N , N , N' , N' - 四甲基對(duì)苯二胺鹽酸鹽 1. 0g
蒸餾水
100. 0mL
B. 7. 2  制法
將 B.
7. 1 成分溶解于冷水中,少量新鮮配制。
B. 7. 3  試驗(yàn)方法
用細(xì)玻璃棒或一次性接種針挑去單個(gè)菌落,涂布在氧化酶試劑濕潤(rùn)的濾紙上。在 10s 內(nèi)呈現(xiàn)粉紅
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或紫紅色,即為氧化酶試驗(yàn)陽(yáng)性。不變色者為氧化酶試驗(yàn)陰性。
B. 8  無(wú)菌 1mol
/ LNaOH
B. 8. 1  成分
NaOH 40. 0g
蒸餾水
1000. 0mL
B. 8. 2  制法
稱(chēng)取 40g 氫氧化鈉溶于 1000mL 蒸餾水中,
121℃ 高壓滅菌 15min 。
B. 9  無(wú)菌 1mol
/ LHCl
B. 9. 1  成分
HCl 90. 0mL
蒸餾水
1000. 0mL
B. 9. 2  制法
移取濃鹽酸 90mL ,用蒸餾水稀釋至 1000mL ,
121℃ 高壓滅菌 15min 。
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附 錄 C
腸桿菌科最可能數(shù)( MPN )檢索表
每克(毫升)檢樣中腸桿菌科最可能數(shù)( MPN )的檢索見(jiàn)表 C. 1 。
表 C.
1  腸桿菌科最可能數(shù)( MPN )的檢索表
陽(yáng)性管數(shù)
0. 10 0. 01 0. 001
MPN
95% 置信區(qū)間
下限 上限
陽(yáng)性管數(shù)
0. 10 0. 01 0. 001
MPN
95% 置信區(qū)間
下限 上限
0 0 0 <3. 0
—
9. 5 2 2 0 21 4. 5 42
0 0 1 3. 0 0. 15 9. 6 2 2 1 28 8. 7 94
0 1 0 3. 0 0. 15 11 2 2 2 35 8. 7 94
0 1 1 6. 1 1. 2 18 2 3 0 29 8. 7 94
0 2 0 6. 2 1. 2 18 2 3 1 36 8. 7 94
0 3 0 9. 4 3. 6 38 3 0 0 23 4. 6 94
1 0 0 3. 6 0. 17 18 3 0 1 38 8. 7 110
1 0 1 7. 2 1. 3 18 3 0 2 64 17 180
1 0 2 11 3. 6 38 3 1 0 43 9 180
1 1 0 7. 4 1. 3 20 3 1 1 75 17 200
1 1 1 11 3. 6 38 3 1 2 120 37 420
1 2 0 11 3. 6 42 3 1 3 160 40 420
1 2 1 15 4. 5 42 3 2 0 93 18 420
1 3 0 16 4. 5 42 3 2 1 150 37 420
2 0 0 9. 2 1. 4 38 3 2 2 210 40 430
2 0 1 14 3. 6 42 3 2 3 290 90 1000
2 0 2 20 4. 5 42 3 3 0 240 42 1000
2 1 0 15 3. 7 42 3 3 1 460 90 2000
2 1 1 20 4. 5 42 3 3 2 1100 180 4100
2 1 2 27 8. 7 94 3 3 3 >1100 420
—
注 1 :本表采用 3 個(gè)稀釋度[ 0. 1g ( mL )、 0. 01g ( mL )和 0. 001g ( mL )],每個(gè)稀釋度接種 3 管。
注 2 :表內(nèi)所列檢樣量如改用 1g ( mL )、 0.
1g ( mL )和 0.
01g ( mL )時(shí),表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)降低 10 倍;如改用 0.
01g
( mL )、
0. 001g ( mL )、 0. 0001g ( mL )時(shí),則表內(nèi)數(shù)字應(yīng)相應(yīng)增高 10 倍,其余類(lèi)推。